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双荧光素酶报告基因实验


    荧光素酶(luciferase)是自然界中能够发出荧光的酶的总称,能够通过酶促反应催化底物产生荧光。目前,萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase)是目前应用广泛的两种荧光素酶,两种荧光的吸收波长不同,因此可用于同一个化学反应中。双荧光素酶报告基因实验系统通常采用一个报告基因作为内参,是另一个报告基因的检测均一化。

    通常情况下,需要将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆到萤火虫荧光素酶基因的上游,或者把3’-UTR区或者LncRNA序列克隆至萤火虫荧光素酶基因的下游,从而研究启动子的强弱、转录因子对启动子的作用以及miRNA对目的基因或者LncRNA的调控作用。

    目前,双荧光素酶报告基因实验主要用于以下几个方面的研究:(1)启动子、增强子、转录因子研究;(2)miRNA、LncRNA和siRNA等相互作用;(3)信号转导通路研究等。

    例子:在对miRNA靶点预测的过程中,通过Targetscan、miRDB等数据库可预测miRNA与mRNAs的3’-UTR区的结合位点;对于LncRNA、circRNA以及数据库中无法预测到的mRNA,则可以选择通过条件开放型的序列对比,找出潜在的靶位点,进行后续的研究。


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